Pax-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422120

Übersicht

Pax7 kodiert Pax-7, einen Paired-Box-Transkriptionsfaktor, der Skelettmuskel-Satellitenzellen definiert und erhält und während Entwicklung und Regeneration die Festlegung der myogenen Zelllinie koordiniert. Pax-7 reguliert Genexpressionsprogramme, die die Selbsterneuerung, das Überleben und die Differenzierung von Vorläuferzellen steuern, und ist mit Signalnetzwerken wie Notch und Wnt verknüpft, die die Stammzell-Quieszenz und -Aktivierung feinabstimmen. In Mausmodellen stört eine veränderte Pax-7-Funktion die Dynamik der Muskelreparatur und die Homöostase des Satellitenzellpools, was seine Relevanz für die Untersuchung von Mechanismen untermauert, die Muskelabbau, eingeschränkte Regeneration und Entwicklungsmyopathien zugrunde liegen. Pax-7 wird zudem als Marker und Regulator in der neuromuskulären Biologie und in Zellschicksalsstudien eingesetzt, in denen die transkriptionelle Kontrolle der Myogenese ein zentrales Ergebnismaß ist.

Das Pax-7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pax7-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pax7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pax7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Pax-7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pax7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Pax-7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pax7-Exone abzielen, die für die Pax-7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pax7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Pax-7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Pax-7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pax7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Pax-7 HDR-Plasmid (m) und Pax-7 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pax7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pax7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.