Plasmide CRISPR/Cas9 KO Pax-6 (m): sc-422119

Présentation

Le gène murin Pax6 code le facteur de transcription à domaine paired box Pax-6, un régulateur maître du développement de l’œil et du système nerveux central, qui contrôle la spécification des lignages, la neurogenèse et la mise en place des patrons tissulaires. Pax-6 se lie à des éléments amplificateurs (enhancers) afin d’orchestrer des programmes d’expression génique régissant la prolifération et la différenciation des progéniteurs, en s’intégrant à des réseaux de signalisation du développement, notamment les voies Wnt, SHH et FGF. Dans les tissus matures, Pax-6 contribue au maintien de l’identité neuronale et à la régulation des gènes endocrines du pancréas, soutenant ainsi l’homéostasie du glucose. Une activité ou un dosage de Pax6 dérégulés sont fortement associés à des malformations oculaires congénitales et à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait une cible majeure pour les études mécanistiques des circuits de régulation génique du développement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Pax-6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pax6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pax6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pax6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Pax-6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pax6 pour l'étude de la signalisation de Pax-6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pax6 essentiels à la fonction de Pax-6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pax6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Pax-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Pax-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pax6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Pax-6 plasmide HDR (m) et le Pax-6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pax6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pax6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.