Plasmide CRISPR d'Activation (h) Pax-6: sc-418357-ACT

PAX6 code Pax-6, un facteur de transcription à domaine « paired box »/homeobox qui agit comme régulateur maître de la spécification des lignages neuroectodermiques et oculaires. En se liant à des éléments cis‑régulateurs et en coordonnant des réseaux transcriptionnels avec d’autres régulateurs du développement, Pax-6 contribue à contrôler les décisions de destin cellulaire, la prolifération des progéniteurs et les programmes de différenciation dans l’œil, le prosencéphale et les compartiments des îlots pancréatiques. L’activité de PAX6 s’articule avec des voies de signalisation du développement plus larges, notamment les circuits de régulation génique associés à WNT, SHH et TGF‑β, afin d’établir la structuration spatiale et la morphogenèse tissulaire. Une dérégulation de l’expression ou du dosage de PAX6 est associée à des malformations oculaires congénitales et à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait une cible largement utilisée pour modéliser le contrôle transcriptionnel dans des systèmes humains.

Pax-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PAX6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Pax-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PAX6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PAX6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Pax-6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PAX6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Pax-6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Pax-6 dans les cellules tumorales présentant une expression de PAX6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.