Plasmide CRISPR/Cas9 KO PAWP (h): sc-406196

Présentation

WBP2NL code PAWP (postacrosomal WW domain-binding protein), un facteur d’origine spermatique enrichi dans la gaine post-acrosomiale, qui contribue à l’activation de l’ovocyte lors de la fécondation. PAWP contient des motifs PPXY qui interagissent avec des adaptateurs de signalisation porteurs de domaines WW, le reliant à des réseaux régulateurs dépendants de la phosphorylation impliqués dans les oscillations calciques précoces de l’embryon et la reprise du cycle cellulaire. Des études fonctionnelles associent une expression ou une activité altérée de PAWP à une fécondation compromise, à un développement embryonnaire anormal et à certaines formes d’infertilité masculine. En tant que régulateur spécifique des cellules germinales, WBP2NL constitue un modèle accessible pour disséquer la signalisation spermatozoïde–ovocyte, le contrôle qualité des gamètes et les interactions entre voies de la reproduction.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PAWP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène WBP2NL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du WBP2NL, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert WBP2NL à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PAWP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en WBP2NL pour l'étude de la signalisation de PAWP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de WBP2NL essentiels à la fonction de PAWP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de WBP2NL pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PAWP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PAWP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus WBP2NL. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PAWP plasmide HDR (h) et le PAWP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie WBP2NL pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles WBP2NL définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.