Plasmide CRISPR d'Activation (h) PATZ1: sc-404881-ACT

PATZ1 (POZ/BTB and AT-hook containing zinc finger 1) est un régulateur transcriptionnel humain qui se fixe à l’ADN riche en AT et module des programmes d’expression génique contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et l’apoptose. Grâce à son domaine BTB/POZ et à ses motifs « zinc finger », PATZ1 participe à la régulation associée à la chromatine et peut influencer des réseaux liés à la pluripotence, à la mise en place des patrons développementaux et aux réponses au stress. Une activité dérégulée de PATZ1 a été associée à des états transcriptionnels altérés observés dans plusieurs contextes pathologiques, notamment en cancérologie, où elle peut affecter la prolifération et l’identité de lignée. En tant que facteur nucléaire à large portée régulatrice, PATZ1 est fréquemment étudié dans le contrôle transcriptionnel, la régulation épigénétique et le remaniement des voies de signalisation sous l’effet de signaux oncogéniques ou de différenciation.

PATZ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PATZ1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PATZ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PATZ1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PATZ1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PATZ1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PATZ1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PATZ1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PATZ1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PATZ1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.