Plasmide Double Nickase (m) patched/PTCH1: sc-422471-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) patched/PTCH1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide patched/PTCH1 Double Nickase (m) et le plasmide patched/PTCH1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ptch1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: patched/PTCH1 Antibody (3B3): sc-293416
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) patched/PTCH1 | sc-422471-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) patched/PTCH1 | sc-422471-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Ptch1 code pour le récepteur patched (PTCH1) de la souris, une protéine transmembranaire à 12 passages qui constitue le principal inhibiteur de Smoothened dans la voie de signalisation Hedgehog. La liaison de ligands Hedgehog tels que SHH lève la répression médiée par PTCH1, ce qui permet l’activation de programmes transcriptionnels en aval dépendants de GLI, lesquels régulent la mise en place des patrons embryonnaires, le comportement des cellules souches et progénitrices, ainsi que l’homéostasie tissulaire. Une perturbation du contrôle de la signalisation dépendant de PTCH1 est associée à une activation aberrante de la voie Hedgehog et fait l’objet de nombreuses études dans les troubles du développement et la biologie tumorale. Ptch1 constitue donc un nœud clé pour étudier la transduction des signaux associée aux cils, les gradients de morphogènes et la régulation transcriptionnelle au cours du développement et de la modélisation de maladies dans les systèmes murins.
patched/PTCH1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ptch1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ptch1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ptch1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ptch1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.