Plasmide CRISPR d'Activation (h) PARP-7: sc-407777-ACT

TIPARP humain code PARP-7 (poly(ADP-ribose) polymérase inductible par le TCDD), une mono-ADP-ribosyltransférase qui modifie des protéines substrats afin de réguler la transduction du signal, les programmes transcriptionnels et la stabilité des protéines. PARP-7 est induite en aval de la signalisation du récepteur des hydrocarbures aromatiques (AHR) et participe au contrôle par rétroaction des voies de réponse aux xénobiotiques, façonnant l’adaptation cellulaire aux ligands environnementaux. Par une modulation, dépendante de l’ADP-ribosylation, de protéines régulatrices, TIPARP influence des réseaux d’expression génique sensibles au stress ainsi que des processus liés à l’immunité. Des altérations de l’activité TIPARP/PARP-7 ont été associées à une dérégulation de la signalisation inflammatoire et à des états transcriptionnels pertinents pour le cancer, ce qui étaye des études mécanistiques sur le dialogue entre voies de signalisation.

PARP-7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TIPARP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PARP-7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TIPARP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TIPARP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PARP-7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TIPARP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PARP-7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PARP-7 dans les cellules tumorales présentant une expression de TIPARP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.