PARP-14 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402812-ACT

Humanes PARP14 (PARP-14; ARTD8) ist eine Mono-ADP-Ribosyltransferase, die die ADP-Ribosylierung von Zielproteinen katalysiert, um Transkriptionsprogramme, Signaltransduktion und Protein-Protein-Interaktionen zu modulieren. Es wirkt in nukleären und zytoplasmatischen Kontexten und integriert Signale aus Zytokin-Signalwegen und Stressantworten, um die Differenzierung von Immunzellen, die Expression inflammatorischer Gene und die metabolische Regulation zu beeinflussen. PARP-14 wurde mit STAT-abhängiger transkriptioneller Kontrolle, interferonassoziierten Signalwegen sowie der Regulation von RNA- und chromatinassoziierten Komplexen in Verbindung gebracht. Eine dysregulierte PARP14-Aktivität oder -Expression wird mit veränderter Immun-Signalübertragung assoziiert und wurde im Zusammenhang mit Entzündung, Fibrose und Tumorbiologie untersucht – als Knotenpunkt, der Zytokinantworten mit dem transkriptionellen Output verknüpft.

PARP-14 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PARP14-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PARP-14 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PARP14-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PARP14-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PARP-14-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PARP14-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PARP-14-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PARP-14-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PARP14-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.