Plasmide CRISPR d'Activation (m) PARP-10: sc-437160-ACT

Le gène murin **Parp10** code **PARP-10**, une mono(ADP-ribosyl)transférase qui catalyse la MARylation des protéines et aide à coordonner les réponses cellulaires au stress de réplication de l’ADN, à l’homéostasie protéique et à la signalisation immunitaire innée. PARP-10 a été associée à la régulation du choix des voies de réparation de l’ADN et à la stabilité des fourches de réplication, et peut moduler des réseaux de signalisation en ADP-ribosylant des protéines substrats spécifiques. Par ces activités, PARP-10 contribue au contrôle de la progression du cycle cellulaire, des programmes transcriptionnels induits par le stress et des cascades de signalisation inflammatoire. Une activité dérégulée de la famille des PARP, y compris des voies associées à PARP-10, est pertinente pour les études mécanistiques de l’instabilité génomique, de l’adaptation au stress liée au cancer et de la biologie des maladies à médiation immunitaire.

PARP-10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Parp10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PARP-10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Parp10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Parp10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PARP-10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Parp10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PARP-10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PARP-10 dans les cellules tumorales présentant une expression de Parp10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.