Plasmide Double Nickase (h) Parkin: sc-400226-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Parkin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Parkin Double Nickase (h) et le plasmide Parkin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PARK2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Parkin Antibody (PRK8): sc-32282
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Parkin | sc-400226-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Parkin | sc-400226-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PARK2 code pour Parkin, une ligase E3 d’ubiquitine de la famille RBR qui coordonne le renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine ainsi que le contrôle qualité des mitochondries. En réponse à une dépolarisation mitochondriale, Parkin est recrutée en aval de PINK1 afin d’ubiquitinyler des substrats de la membrane externe mitochondriale, favorisant la mitophagie et le remodelage de la dynamique mitochondriale. Par ses fonctions dans la protéostasie, les réponses au stress oxydant et le maintien synaptique, une activité de Parkin dérégulée est associée à une vulnérabilité neuronale et fait l’objet de nombreuses études dans le contexte de la maladie de Parkinson à début précoce et de mécanismes neurodégénératifs apparentés. Parkin interfère également avec des voies de signalisation inflammatoires et des voies d’adaptation métabolique, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la dysfonction mitochondriale dans différents types cellulaires.
Parkin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PARK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PARK2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PARK2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PARK2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.