Plasmide CRISPR/Cas9 KO PARD3B (h): sc-406097

Présentation

PARD3B (régulateur bêta de la polarité cellulaire de la famille PAR-3) est une protéine d’échafaudage qui contribue à l’établissement et au maintien de la polarité apico-basale dans les cellules épithéliales en organisant des complexes de polarité au niveau des jonctions serrées. Elle agit au sein de réseaux de polarité conservés impliquant les protéines PAR et la signalisation des petites GTPases afin de coordonner la localisation asymétrique des protéines, l’intégrité jonctionnelle et l’organisation du cytosquelette. Par ces processus, PARD3B influence la migration cellulaire, l’architecture tissulaire et la compartimentation des signaux, pouvant moduler les programmes de prolifération et de différenciation. La dérégulation des régulateurs de polarité, y compris des voies associées à PARD3B, est fréquemment étudiée dans le contexte de la désorganisation épithéliale, de phénotypes liés à l’invasion et d’autres états cellulaires pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PARD3B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PARD3B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PARD3B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PARD3B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PARD3B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PARD3B pour l'étude de la signalisation de PARD3B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PARD3B essentiels à la fonction de PARD3B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PARD3B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PARD3B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PARD3B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PARD3B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PARD3B plasmide HDR (h) et le PARD3B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PARD3B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PARD3B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.