Plasmide Double Nickase (h) PAR4: sc-401142-NIC

PAWR code la protéine pro‑apoptotique PAR4 (prostate apoptosis response‑4), un facteur associé à la suppression tumorale qui module les voies d’apoptose intrinsèque et extrinsèque et antagonise les signaux pro‑survie. PAR4 influence des programmes transcriptionnels et de réponse au stress via des interactions avec des isoformes atypiques de PKC, des nœuds de régulation de NF‑κB et la machinerie apoptotique, ce qui la relie au contrôle des décisions de destinée cellulaire en conditions de stress génotoxique et inflammatoire. Une expression altérée de PAWR/PAR4 a été rapportée dans de nombreux cancers humains et est associée à des modifications de la sensibilité à l’apoptose, de la différenciation cellulaire et du comportement métastatique. En dehors du contexte oncologique, PAR4 a également été impliquée dans la neurodégénérescence et d’autres troubles où une dérégulation de la mort cellulaire et de la signalisation du stress contribue à la physiopathologie.

PAR4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PAWR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PAWR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PAWR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PAWR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.