PAR4 Plasmide Double Nickase (h): sc-401142-NIC

PAWR codifica la proteina pro-apoptotica PAR4 (prostate apoptosis response-4), un fattore associato ai soppressori tumorali che modula le vie apoptotiche intrinseca ed estrinseca e antagonizza i segnali pro-sopravvivenza. PAR4 influenza programmi trascrizionali e di risposta allo stress attraverso interazioni con isoforme atipiche di PKC, nodi regolatori di NF-κB e la macchina apoptotica, collegandosi così al controllo delle decisioni sul destino cellulare in condizioni di stress genotossico e infiammatorio. Alterazioni dell’espressione di PAWR/PAR4 sono state riportate in numerosi tumori umani e sono associate a cambiamenti nella sensibilità all’apoptosi, nella differenziazione cellulare e nel comportamento metastatico. Oltre ai contesti oncologici, PAR4 è stata implicata nella neurodegenerazione e in altri disturbi in cui la disregolazione della morte cellulare e della segnalazione di stress contribuisce alla patologia.

PAR4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PAWR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PAWR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PAWR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PAWR interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.