Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
PAR4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431134
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PAR4 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PAR4, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PAR4 Anticuerpo (A-10): sc-1666
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PAR4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-431134 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Mouse Pawr codifica PAR4 (respuesta 4 de apoptosis prostática), una proteína rica en prolina que contiene un motivo “cremallera de leucina” y que modula programas transcripcionales que controlan decisiones sobre el destino celular. PAR4 promueve la señalización apoptótica y puede antagonizar vías prosupervivencia, incluidas interacciones que influyen en la actividad de NF-κB y en cascadas de señalización de quinasas de proteínas, como respuestas dependientes de PKC. Se ha relacionado con respuestas al estrés celular, diferenciación y regulación del citoesqueleto gracias a su capacidad para actuar como andamio de complejos de señalización y regular la expresión génica. La actividad desregulada de PAWR/PAR4 se ha asociado con umbrales de apoptosis alterados en biología del cáncer y con procesos vinculados a inflamación y neurodegeneración, donde se ven perturbadas la muerte celular inducida por estrés y la señalización de supervivencia.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PAR4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pawr en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pawr junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pawr tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PAR4.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pawr para la investigación de la señalización de PAR4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Pawr críticos para la función de PAR4
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pawr para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PAR4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PAR4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pawr. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PAR4 (m) y el plásmido HDR PAR4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pawr para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pawr definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.