Plasmide CRISPR/Cas9 KO PAR-4 (m): sc-420267

Présentation

La souris F2rl3 code le récepteur activé par les protéases 4 (PAR‑4), un récepteur couplé aux protéines G activé par des protéases à sérine telles que la thrombine, via le dévoilement protéolytique d’un ligand attaché. PAR‑4 se couple principalement aux voies de signalisation Gq et G12/13, entraînant la mobilisation intracellulaire de Ca2+, un remodelage du cytosquelette dépendant de RhoA/ROCK, ainsi que des réponses en aval des voies MAPK et NF‑κB qui modulent l’activation plaquettaire, la signalisation inflammatoire et l’homéostasie vasculaire. Dans les contextes immunitaire et vasculaire, l’activité de F2rl3/PAR‑4 contribue à l’adhésion cellulaire et à la régulation de la barrière, et est fréquemment étudiée dans des modèles de thrombose, d’inflammation et de stress cardiométabolique. Une signalisation PAR‑4 altérée a également été associée à des signaux du microenvironnement tumoral, ce qui renforce sa pertinence pour des études mécanistiques sur le dialogue entre hémostase et inflammation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PAR-4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène F2rl3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du F2rl3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert F2rl3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PAR-4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en F2rl3 pour l'étude de la signalisation de PAR-4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de F2rl3 essentiels à la fonction de PAR-4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de F2rl3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PAR-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PAR-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus F2rl3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PAR-4 plasmide HDR (m) et le PAR-4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie F2rl3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles F2rl3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.