PAR-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420266

Visão geral

O gene murino F2rl2 codifica o receptor ativado por protease 3 (PAR-3), um membro da família dos GPCRs ativado no contexto da sinalização por proteases extracelulares e de estímulos associados à coagulação. O PAR-3 participa de redes de receptores ativados por protease que podem acionar a sinalização por proteínas G heterotriméricas e coordenar vias a jusante que influenciam o fluxo de cálcio, respostas de MAPK e remodelamento do citoesqueleto em tipos celulares responsivos. Em sistemas murinos, o F2rl2 é estudado por seus papéis na biologia vascular e inflamatória, na sinalização associada a plaquetas e na comunicação estroma-imune em microambientes teciduais. A desregulação da sinalização de receptores ativados por protease é relevante em modelos de trombose, inflamação e biologia do câncer, nos quais alterações na expressão do receptor ou no tônus de sinalização podem remodelar a migração celular e processos associados a barreiras.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PAR-3 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene F2rl2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do F2rl2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do F2rl2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PAR-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de F2rl2 para a investigação da sinalização de PAR-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) F2rl2 críticos para a função PAR-3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos F2rl2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PAR-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PAR-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus F2rl2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PAR-3 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PAR-3 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia F2rl2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo F2rl2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.