Plasmide CRISPR/Cas9 KO PAR-2 (m2): sc-420265-KO-2

Présentation

F2rl1 code le récepteur activé par les protéases de type 2 (PAR-2), un récepteur couplé aux protéines G activé par le clivage par des protéases à sérine, qui expose un ligand « attaché » (tethered ligand) et initie une signalisation via les voies Gq/11, Gi/o et G12/13. La stimulation de PAR-2 mobilise le Ca2+ intracellulaire, active les cascades MAPK/ERK et NF-κB, et favorise des programmes transcriptionnels associés à la production de cytokines, à la régulation de la barrière et à la sensibilisation nociceptive. Dans les tissus murins, PAR-2 est largement exprimé dans les compartiments épithéliaux et endothéliaux, les cellules immunitaires et les neurones sensoriels, où il coordonne des réponses inflammatoires et de remodelage tissulaire. Une activité dérégulée de PAR-2 a été impliquée dans des modèles d’inflammation des voies aériennes et de l’intestin, de dermatite, de douleur et de signalisation au sein du microenvironnement tumoral, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la biologie dépendante des protéases.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PAR-2 (m2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène F2rl1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du F2rl1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert F2rl1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PAR-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en F2rl1 pour l'étude de la signalisation de PAR-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de F2rl1 essentiels à la fonction de PAR-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de F2rl1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PAR-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PAR-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus F2rl1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PAR-2 plasmide HDR (m) et le PAR-2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie F2rl1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles F2rl1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.