Plasmide CRISPR/Cas9 KO PAP-β (h): sc-403907

Présentation

PAPOLB code la poly(A) polymérase bêta (PAP-β), une enzyme de polyadénylation non canonique dont l’expression est enrichie dans les cellules germinales mâles et qui soutient le contrôle post-transcriptionnel au cours de la spermatogenèse. En allongeant les queues poly(A) de certains ARNm, PAP-β influence la stabilité des transcrits, leur export nucléaire et l’activation de leur traduction, en s’intégrant à des réseaux plus larges de maturation des ARN et de surveillance des ARNm. Une activité altérée de PAPOLB a été associée à des défauts de développement des spermatozoïdes et à des phénotypes de fertilité diminuée, ce qui en fait un gène pertinent pour l’étude de la régulation génique dans la lignée germinale. PAPOLB constitue également un modèle pour analyser comment des poly(A) polymérases spécialisées façonnent des programmes d’expression génique spécifiques de certains stades.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PAP-β (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PAPOLB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PAPOLB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PAPOLB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PAP-β.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PAPOLB pour l'étude de la signalisation de PAP-β, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PAPOLB essentiels à la fonction de PAP-β
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PAPOLB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PAP-β plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PAP-β plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PAPOLB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PAP-β plasmide HDR (h) et le PAP-β (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PAPOLB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PAPOLB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.