Plasmide CRISPR/Cas9 KO PAO (m): sc-432791

Présentation

La Smox murine code la polyamine oxydase (PAO), une enzyme flavino-dépendante qui catalyse la rétroconversion des polyamines, contribuant à l’homéostasie de la spermine et de la spermidine et régulant le flux intracellulaire de polyamines. L’activité de la PAO relie le métabolisme des polyamines à l’équilibre rédox cellulaire via la production de peroxyde d’hydrogène et d’aldéhydes réactifs, influençant les réponses au stress oxydatif, la fonction mitochondriale et la signalisation inflammatoire. Une régulation altérée de SMOX/PAO a été associée à une prolifération dérégulée, à une susceptibilité accrue aux dommages à l’ADN et à des contextes de lésions tissulaires où le renouvellement des polyamines et la signalisation des espèces réactives de l’oxygène (ROS) se croisent, notamment en biologie du cancer et dans des modèles de neuroinflammation. En tant que nœud métabolique, la PAO offre un point d’entrée mécanistique pour étudier comment le catabolisme des polyamines module les décisions de destinée cellulaire et les voies d’adaptation au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PAO (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Smox dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Smox, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Smox à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PAO.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Smox pour l'étude de la signalisation de PAO, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Smox essentiels à la fonction de PAO
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Smox pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PAO plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PAO plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Smox. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PAO plasmide HDR (m) et le PAO (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Smox pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Smox définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.