PAO CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404683

Übersicht

Das humane Gen **SMOX** kodiert die Polyaminoxidase (PAO), ein peroxisomales, flavinabhängiges Enzym, das die oxidative Rückkonversion von Spermine zu Spermidin katalysiert und damit den Polyaminfluss mit dem zellulären Redoxgleichgewicht verknüpft. Bei dieser Reaktion entstehen Wasserstoffperoxid und Aldehyd-Nebenprodukte, wodurch die SMOX-Aktivität mit Signalkaskaden des oxidativen Stresses, DNA-Schadensantworten sowie der Regulation von Proliferation und Differenzierung in Verbindung steht. **SMOX/PAO** greift in Netzwerke der Polyaminbiosynthese und des -abbaus ein, die die Chromatindynamik und die Translation beeinflussen, und eine Dysregulation wird in der Literatur mit Entzündung, Neurodegeneration und krebsassoziiertem metabolischem Remodeling in Zusammenhang gebracht. Als Knotenpunkt der Polyaminhomöostase wird **SMOX** häufig hinsichtlich seiner Auswirkungen auf die Mitochondrienfunktion, die Anfälligkeit für Ferroptose und stressadaptive Transkriptionsprogramme untersucht.

Das PAO CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SMOX-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SMOX-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SMOX nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PAO-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SMOX-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PAO-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SMOX-Exone abzielen, die für die PAO-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SMOX-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PAO CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PAO CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SMOX-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PAO HDR-Plasmid (h) und PAO HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SMOX-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SMOX-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.