Particules Lentivirales d'Activation (m) Pannexin-1: sc-424967-LAC

Panx1 code la pannexine‑1, un canal de membrane plasmique largement exprimé qui permet la libération régulée d’ATP et d’autres petites molécules afin de soutenir la signalisation paracrine. L’activité de la pannexine‑1 s’intègre aux voies des récepteurs purinergiques (P2X/P2Y) pour moduler les flux de calcium, la signalisation associée à l’inflammasome et des réponses cellulaires coordonnées lors du stress, de stimulations mécaniques et de la mort cellulaire. Dans les modèles murins, Panx1 a été impliqué dans la modulation du recrutement des cellules immunitaires et des réseaux de cytokines, ainsi que dans la régulation de la communication neuronale et gliale via la signalisation par les nucléotides extracellulaires. Un dysfonctionnement du canal PANX1 et des dynamiques altérées de libération d’ATP sont fréquemment étudiés comme cibles de recherche mécanistique, notamment dans la neuroinflammation, la douleur neuropathique, les réponses aux lésions ischémiques et les interactions tumeur–système immunitaire.

Les particules d'activation lentivirales Pannexin-1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Panx1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Pannexin-1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Panx1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Pannexin-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Panx1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.