Plasmide CRISPR/Cas9 KO palladin (m2): sc-428317-KO-2

Présentation

Le gène murin **Palld** code la **palladine**, une protéine d’échafaudage associée à l’actine qui coordonne l’organisation du cytosquelette en se liant à des régulateurs de l’actine et en reliant entre eux des composants au niveau des fibres de stress, des adhésions focales et d’autres complexes d’adhérence. La palladine contribue au contrôle de la forme cellulaire, à la maturation des adhésions et à la migration dirigée, en intégrant des signaux issus des GTPases de la famille Rho et de voies régissant la contractilité actomyosine et les interactions avec la matrice extracellulaire. Des altérations de l’expression ou de la localisation de la palladine ont été associées à un remodelage tissulaire anormal et à des phénotypes invasifs dans des contextes liés au cancer, faisant de **Palld** un nœud pertinent pour l’étude de la dysrégulation du cytosquelette. Chez la souris, la perturbation de **Palld** est couramment utilisée pour disséquer les mécanismes de motilité, de mécanotransduction et de signalisation dépendante des adhésions dans des modèles de développement et de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO palladin (m2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Palld dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Palld, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Palld à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine palladin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Palld pour l'étude de la signalisation de palladin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Palld essentiels à la fonction de palladin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Palld pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le palladin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le palladin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Palld. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le palladin plasmide HDR (m) et le palladin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Palld pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Palld définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.