Plasmide CRISPR/Cas9 KO PAK5 (h): sc-404073

Présentation

PAK5 (p21-activated kinase 5) est une kinase sérine/thréonine activée en aval des GTPases de la famille Rho, telles que Cdc42 et Rac, intégrant des signaux qui régulent le remodelage du cytosquelette, la croissance des neurites et la survie cellulaire. Elle se localise aux mitochondries et dans d’autres compartiments subcellulaires, où elle peut influencer la signalisation liée à l’apoptose et les réponses au stress. PAK5 participe à des voies contrôlant la motilité et la polarité cellulaires via la phosphorylation d’intermédiaires du cytosquelette et de la signalisation, reliant les signaux extracellulaires à des modifications de l’adhérence et de la migration. Une activité ou une expression dérégulée de PAK5 a été associée à des phénotypes de prolifération aberrante, d’invasion et de résistance aux traitements dans de multiples contextes oncologiques, et elle est également pertinente en neurobiologie en raison de ses rôles dans le développement neuronal et la fonction synaptique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PAK5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PAK5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PAK5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PAK5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PAK5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PAK5 pour l'étude de la signalisation de PAK5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PAK5 essentiels à la fonction de PAK5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PAK5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PAK5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PAK5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PAK5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PAK5 plasmide HDR (h) et le PAK5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PAK5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PAK5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.