Plasmide Double Nickase (h) PAK4: sc-401895-NIC

PAK4 code la kinase 4 activée par p21, une kinase sérine/thréonine qui agit en aval des GTPases de la famille Rho telles que Cdc42 pour coordonner le remodelage du cytosquelette, la polarité cellulaire et la migration directionnelle. La signalisation de PAK4 s’articule avec des voies contrôlant le renouvellement des adhésions focales, la dynamique de l’actine et des signaux pro-survie, influençant des processus tels que la croissance dépendante de l’adhérence et le comportement invasif. Par la phosphorylation de substrats cytosquelettiques et régulateurs, PAK4 contribue à la régulation de la résistance à l’apoptose et de la progression du cycle cellulaire. Une expression ou une activité dérégulée de PAK4 a été associée à des contextes de signalisation oncogénique et à des phénotypes métastatiques, ce qui en fait une cible fréquente dans les études portant sur la motilité des cellules tumorales et les mécanismes de survie.

PAK4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PAK4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PAK4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PAK4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PAK4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.