Paf1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417797

Übersicht

PAF1 kodiert Paf1, eine zentrale Untereinheit des mit der RNA-Polymerase II assoziierten Factor-1-Komplexes (PAF1C), der die Transkriptionselongation mit der kotranskriptionellen RNA-Prozessierung und der Chromatinregulation koordiniert. Über Interaktionen mit Pol II und der Elongationsmaschinerie beeinflusst PAF1C das promotornahe Pausieren, die 3′-Endbildung von mRNA sowie die Ablagerung von Histonmarkierungen, die mit aktiver Transkription verknüpft sind, darunter H3K4- und H3K36-Methylierung. Paf1 trägt zur Genomstabilität bei, indem es Transkriptions-Replikations-Konflikte und DNA-Schadensantworten moduliert, und ist an der Kontrolle von Zellzyklus- und Differenzierungsprogrammen beteiligt. Eine fehlregulierte PAF1C-Aktivität und veränderte PAF1-Expression wurden mit aberranten Transkriptionsprogrammen in mehreren Krebsarten und anderen Erkrankungen in Zusammenhang gebracht, die mit epigenetischer und transkriptioneller Fehlregulation einhergehen.

Das Paf1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PAF1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PAF1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PAF1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Paf1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PAF1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Paf1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PAF1-Exone abzielen, die für die Paf1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PAF1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Paf1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Paf1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PAF1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Paf1 HDR-Plasmid (h) und Paf1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PAF1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PAF1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.