Particules Lentivirales d'Activation (h) PAF acetylhydrolase 2: sc-410924-LAC

PAFAH2 code la platelet-activating factor acétylhydrolase 2 (PAF-AH2), une phospholipase intracellulaire qui hydrolyse le groupement acétyle en sn-2 du facteur d’activation plaquettaire (PAF) et de phospholipides oxydés apparentés, modulant ainsi la disponibilité des médiateurs lipidiques et l’homéostasie des lipides membranaires. En limitant les espèces bioactives de type PAF, PAFAH2 influence la signalisation inflammatoire, les réponses au stress oxydatif et des processus en aval tels que la production de cytokines, l’apoptose et l’adaptation cellulaire au stress. Une prise en charge altérée des phospholipides oxydés et de la signalisation du PAF a été associée à des phénotypes inflammatoires et à des contextes de lésions tissulaires, ce qui fait de PAFAH2 un nœud d’intérêt pour étudier la signalisation pilotée par les lipides et les voies régulées par le statut rédox. La modulation expérimentale de PAFAH2 soutient des travaux mécanistiques en immunologie, en biologie vasculaire et dans des modèles de stress métabolique où le renouvellement des phospholipides impacte la fonction cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales PAF acetylhydrolase 2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PAFAH2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PAF acetylhydrolase 2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PAFAH2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PAF acetylhydrolase 2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PAFAH2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.