Particules Lentivirales d'Activation (h) PADI2: sc-403349-LAC

PADI2 code la peptidylarginine déiminase 2 (PAD2), une enzyme dépendante du calcium qui catalyse la citrullination des résidus d’arginine des protéines, modifiant leur charge, leur structure et les interactions protéine–protéine. L’activité de PAD2 influence l’organisation de la chromatine et la régulation transcriptionnelle via la citrullination des histones, et module des protéines du cytosquelette et de la signalisation immunitaire qui façonnent la différenciation cellulaire et les réponses inflammatoires. Une expression ou une activité dérégulée de PADI2 a été associée à l’activation immunitaire aberrante et au remodelage épigénétique observés dans des affections auto-immunes et inflammatoires, et le gène est également étudié pour ses rôles dans des programmes transcriptionnels associés aux tumeurs. Ainsi, PADI2 constitue un nœud utile pour explorer les voies de modifications post-traductionnelles, la signalisation immunitaire innée/adaptative et les réseaux de régulation génique dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PADI2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PADI2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PADI2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PADI2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PADI2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PADI2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.