PADI2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-422175-ACT

Das Mausgen *Padi2* kodiert die Peptidylarginin-Deiminase 2 (PADI2), ein calciumabhängiges Enzym, das die Protein-Citrullinierung katalysiert, indem es Argininreste in Citrullin umwandelt und dadurch Ladung, Struktur und Interaktionsnetzwerke von Proteinen verändert. Die Aktivität von PADI2 moduliert Chromatin- und Transkriptionsprogramme durch Citrullinierung von Histonen und anderen nukleären Substraten; außerdem beeinflusst sie in Kontexten der Differenzierung und inflammatorischen Signalgebung die Funktion zytoskelettaler und extrazellulärer Proteine. Eine fehlregulierte Citrullinierung wurde mit der Entstehung von Autoantigenen und einer aberranten Immunaktivierung in Verbindung gebracht, und PADI2 wird häufig in Signalwegen untersucht, die angeborene Immunität, epigenetische Regulation und zelluläre Stressantworten verknüpfen. In Mausmodellen wird die Beeinflussung von *Padi2* genutzt, um die Polarisierung von Immunzellen, epitheliäres Remodeling sowie Mechanismen zu erforschen, die posttranslationale Modifikationen mit dem Zustand der Genregulation koppeln.

PADI2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Padi2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PADI2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Padi2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Padi2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PADI2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Padi2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PADI2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PADI2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Padi2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.