Plasmide CRISPR/Cas9 KO PACAP (r): sc-437378

Présentation

Le polypeptide activaté par l’adénylate cyclase hypophysaire (PACAP ; Adcyap1) est un neuropeptide conservé qui signale principalement via le récepteur PAC1 et peut également engager les récepteurs VPAC pour réguler la transcription dépendante des voies cAMP/PKA et MAPK/ERK. Dans les systèmes nerveux et neuroendocrinien du rat, le PACAP module l’excitabilité neuronale, la libération de neurotransmetteurs, la signalisation de l’axe du stress et des programmes de développement, notamment la croissance des neurites et la survie cellulaire. La signalisation induite par le PACAP s’entrecroise avec l’homéostasie du calcium, la plasticité synaptique et la régulation des médiateurs inflammatoires, reliant cette voie à des mécanismes pertinents pour le traitement de la douleur, les comportements liés au stress et la neuroinflammation. Une activité du PACAP dérégulée a été associée à des altérations du contrôle autonome et métabolique et a été étudiée dans des modèles de phénotypes de type migraine et de vulnérabilité neurodégénérative.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PACAP (r) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PACAP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de PACAP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de PACAP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PACAP plasmide CRISPR/Cas9 KO (r) et le PACAP plasmide CRISPR/Cas9 KO (r2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PACAP plasmide HDR (r) et le PACAP (r2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.