Plasmide Double Nickase (h) PABP: sc-400688-NIC

Le gène humain **PABPC1** code la protéine de liaison à la poly(A) (**PABP**), un facteur central de liaison à l’ARN qui recouvre les queues poly(A) des ARNm et coordonne l’initiation de la traduction, la stabilisation des ARNm et leur dégradation dépendante de la déadénylation. Par ses interactions avec eIF4G et d’autres composants de la machinerie de traduction, PABP favorise la circularisation des ARNm et régule les taux de synthèse protéique, tout en influençant le silençage médié par les miARN et la dynamique des granules de stress. Le contrôle, dépendant de PABP, du devenir des transcrits relie PABPC1 à des voies impliquées dans la croissance cellulaire, les réponses au stress et le contrôle qualité des ARN. Les dérégulations du métabolisme des ARN et du contrôle translationnel impliquent les processus associés à PABPC1 dans la biologie du cancer et dans des phénotypes pertinents pour la neurodégénérescence, où l’altération de la stabilité des ARNm et de la protéostase constitue une caractéristique fréquente.

PABP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PABPC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PABPC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PABPC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PABPC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.