Plasmide Double Nickase (h) p68 RNA Helicase: sc-402401-NIC

DDX5 code l’hélicase ARN p68, une hélicase ARN de type DEAD-box dépendante de l’ATP qui remodèle l’ARN et les complexes ribonucléoprotéiques afin de réguler l’épissage du pré-ARNm, la maturation de l’ARNr, la transcription et la biogenèse des microARN. p68 agit comme un co-régulateur multifonctionnel de facteurs de transcription et de complexes associés à la chromatine, faisant le lien entre le métabolisme de l’ARN et la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et la signalisation du stress. Elle participe à des voies qui contrôlent les programmes transcriptionnels de l’ARN polymérase II et le contrôle qualité de l’ARN, influençant la différenciation et la prolifération cellulaires. Une activité et une expression dérégulées de DDX5 ont été associées à une signalisation oncogénique altérée et à une instabilité du transcriptome, ce qui en fait une cible fréquente dans les études mécanistiques de la biologie tumorale et des défauts de maturation de l’ARN.

p68 RNA Helicase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DDX5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DDX5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DDX5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DDX5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.