Plasmide CRISPR/Cas9 KO p68 RNA Helicase (h): sc-402401

Présentation

DDX5 code l’hélicase ARN p68, une hélicase ARN de type DEAD-box dépendante de l’ATP qui remodèle l’ARN et les complexes ribonucléoprotéiques afin de contrôler l’épissage du pré‑ARNm, la biogenèse des ribosomes et la maturation des microARN. p68 agit également comme co‑régulateur transcriptionnel en interagissant avec des facteurs de transcription sensibles aux voies de signalisation, reliant ainsi le métabolisme de l’ARN à des programmes d’expression génique qui gouvernent la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress. Par ces activités, DDX5 contribue au maintien de l’intégrité du génome et à la coordination des réponses aux dommages de l’ADN avec le traitement de l’ARN. Une expression ou une fonction dérégulée de DDX5 a été associée à des réseaux transcriptionnels oncogéniques et à des modifications des profils d’épissage de l’ARN dans de multiples contextes tumoraux, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des phénotypes pathologiques pilotés par l’ARN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO p68 RNA Helicase (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DDX5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DDX5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DDX5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine p68 RNA Helicase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DDX5 pour l'étude de la signalisation de p68 RNA Helicase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DDX5 essentiels à la fonction de p68 RNA Helicase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DDX5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le p68 RNA Helicase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le p68 RNA Helicase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DDX5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le p68 RNA Helicase plasmide HDR (h) et le p68 RNA Helicase (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DDX5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DDX5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.