Plasmide CRISPR/Cas9 KO P5CRL (h): sc-406033

Présentation

PYCRL code une protéine de type pyrroline‑5‑carboxylate réductase (P5CRL), membre de la famille des réductases dépendantes du NAD(P)H, impliquée dans le métabolisme rédox de la proline et d’acides aminés apparentés. La biosynthèse et le renouvellement de la proline influencent l’équilibre rédox cellulaire, l’homéostasie du NADP(H) et l’adaptation métabolique associée aux mitochondries, reliant PYCRL à des processus plus larges tels que les réponses au stress oxydant et le contrôle des flux biosynthétiques. La perturbation des enzymes de la voie de la proline peut affecter la prolifération, le remodelage de la matrice extracellulaire via les besoins liés au collagène, ainsi que la tolérance au stress nutritionnel. En conséquence, PYCRL présente un intérêt pour l’étude du reprogrammation métabolique dans des contextes pertinents pour les maladies où le métabolisme rédox et celui des acides aminés sont altérés, notamment en cancérologie et dans les dysfonctionnements métaboliques héréditaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO P5CRL (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PYCRL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PYCRL, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PYCRL à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine P5CRL.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PYCRL pour l'étude de la signalisation de P5CRL, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PYCRL essentiels à la fonction de P5CRL
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PYCRL pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le P5CRL plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le P5CRL plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PYCRL. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le P5CRL plasmide HDR (h) et le P5CRL (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PYCRL pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PYCRL définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.