Plasmide CRISPR/Cas9 KO P5CR2 (h): sc-406048

Présentation

PYCR2 code la pyrroline-5-carboxylate réductase 2 (P5CR2), une enzyme mitochondriale qui catalyse la réduction de la pyrroline-5-carboxylate en proline, dépendante du NAD(P)H, soutenant ainsi la biosynthèse de la proline et l’équilibre rédox cellulaire. Cette activité relie le métabolisme des acides aminés à la fonction mitochondriale, aux réponses au stress oxydatif et au maintien de la protéostasie via le cycle dépendant de la proline et l’homéostasie NADP+/NADPH. Une perturbation de PYCR2 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des dysfonctionnements cellulaires liés aux mitochondries, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du contrôle métabolique dans le système nerveux. PYCR2 est donc fréquemment étudié dans des voies reliant le métabolisme mitochondrial, l’adaptation au stress et la régulation de la croissance.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO P5CR2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PYCR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PYCR2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PYCR2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine P5CR2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PYCR2 pour l'étude de la signalisation de P5CR2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PYCR2 essentiels à la fonction de P5CR2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PYCR2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le P5CR2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le P5CR2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PYCR2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le P5CR2 plasmide HDR (h) et le P5CR2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PYCR2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PYCR2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.