P5CR2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406048

Panoramica

PYCR2 codifica la pirrolina-5-carbossilato reduttasi 2 (P5CR2), un enzima mitocondriale che catalizza la riduzione NAD(P)H-dipendente della pirrolina-5-carbossilato a prolina, sostenendo la biosintesi della prolina e l’equilibrio redox cellulare. Questa attività collega il metabolismo degli amminoacidi alla funzione mitocondriale, alle risposte allo stress ossidativo e al mantenimento della proteostasi attraverso il ciclo dipendente dalla prolina e l’omeostasi NADP+/NADPH. L’alterazione di PYCR2 è stata associata a fenotipi di neurosviluppo e a disfunzioni cellulari correlate ai mitocondri, rendendolo rilevante per studi sul controllo metabolico nel sistema nervoso. PYCR2 è pertanto spesso studiato in vie che connettono il metabolismo mitocondriale, l’adattamento allo stress e la regolazione della crescita.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO P5CR2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PYCR2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PYCR2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PYCR2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina P5CR2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PYCR2 per lo studio della segnalazione di P5CR2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PYCR2 critici per la funzione di P5CR2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PYCR2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal P5CR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal P5CR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PYCR2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal P5CR2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR P5CR2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PYCR2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PYCR2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.