Plasmide Double Nickase (h) P5CR: sc-410971-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) P5CR correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide P5CR Double Nickase (h) et le plasmide P5CR Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PYCR1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: P5CR Antibody (A-12): sc-518219
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) P5CR | sc-410971-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) P5CR | sc-410971-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PYCR1 code la pyrroline-5-carboxylate réductase 1 (P5CR), une enzyme mitochondriale qui catalyse la conversion, dépendante du NAD(P)H, de la pyrroline-5-carboxylate en proline, reliant le métabolisme du glutamate/de l’ornithine à la biosynthèse de la proline. Par son rôle dans le cycle de la proline, P5CR contribue à l’équilibre rédox cellulaire, à l’homéostasie mitochondriale et à l’adaptation métabolique en conditions de stress oxydatif ou de privation nutritionnelle. L’activité de PYCR1 s’inscrit à l’interface du métabolisme des acides aminés, du tamponnement des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et de processus liés à la matrice extracellulaire dépendant de la disponibilité en proline. Des altérations génétiques de PYCR1 ont été associées à des phénotypes du tissu conjonctif et du neurodéveloppement, ce qui en fait un point d’entrée pertinent pour étudier la régulation métabolique et les voies de réponse au stress.
P5CR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PYCR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PYCR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PYCR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PYCR1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.