Plasmide CRISPR d'Activation (h) p57 Kip2: sc-400444-ACT

CDKN1C code pour p57 Kip2, un inhibiteur des kinases dépendantes des cyclines de la famille CIP/KIP soumis à empreinte génomique, qui limite l’activité de CDK2 et de CDK1 afin d’imposer un arrêt en phase G1 et de coordonner des programmes de différenciation. p57 Kip2 intègre des signaux issus de voies du développement et de facteurs de croissance, notamment les entrées des voies TGF-β/SMAD et de l’axe PI3K–AKT, pour moduler les points de contrôle du cycle cellulaire, l’engagement de lignée et le contrôle de la croissance tissulaire. Une expression dérégulée de CDKN1C et des défauts d’empreinte sont associés à une prolifération anormale et à des troubles du développement, et les variations des niveaux de p57 Kip2 sont fréquemment étudiées dans des contextes tels que la biologie du cancer, la quiescence des cellules souches et le développement placentaire. En tant que régulateur nucléaire de la prolifération, p57 Kip2 est également pertinent pour la régulation épigénétique au niveau du cluster d’empreinte 11p15 ainsi que pour les voies gouvernant la sénescence et les transitions de destin cellulaire.

p57 Kip2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDKN1C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

p57 Kip2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDKN1C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDKN1C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de p57 Kip2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDKN1C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de p57 Kip2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie p57 Kip2 dans les cellules tumorales présentant une expression de CDKN1C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.