Plasmide CRISPR d'Activation (h) p55: sc-409649-ACT

Le gène humain **MPP1** code la protéine membranaire palmitoylée **p55**, un facteur d’échafaudage de la famille des **MAGUK** qui contribue à organiser des complexes protéiques associés à la membrane et à les coupler au cytosquelette cortical **actine–spectrine**. p55 participe à la stabilité des jonctions et à l’architecture des domaines membranaires via des interactions avec des protéines à **domaine FERM** et d’autres adaptateurs du cytosquelette, influençant la forme cellulaire, la polarité et le trafic intracellulaire. Dans les érythrocytes, **MPP1** contribue à l’intégrité mécanique de la membrane et à l’organisation de microdomaines spécialisés, des processus pertinents pour la déformabilité des globules rouges et les phénotypes de stabilité membranaire. Un échafaudage dépendant de p55 altéré a été étudié dans des contextes où l’ancrage au cytosquelette et la régulation des contacts cellule–cellule sont perturbés, offrant un cadre pour l’étude de l’organisation membranaire dans des états normaux et associés à des maladies.

p55 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MPP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

p55 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MPP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MPP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de p55. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MPP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de p55 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie p55 dans les cellules tumorales présentant une expression de MPP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.