p53 Lentiviral Activation Particles (m): sc-423509-LAC

Das murine Trp53-Gen kodiert den Transkriptionsfaktor p53, einen zentralen Regulator zellulärer Stressantworten, der die DNA-Schadenssignalgebung, den Zellzyklusarrest, Seneszenz und Apoptose koordiniert. p53 integriert Signale aus den ATM/ATR–CHK-Signalwegen und wird über die MDM2-Achse moduliert, um die genomische Stabilität durch transkriptionelle Kontrolle von Zielgenen zu sichern, die an Reparaturprozessen, Stoffwechsel und Redox-Homöostase beteiligt sind. Eine Störung oder Abschwächung der Trp53-Funktion ist eng mit onkogener Transformation und veränderten Reaktionen auf genotoxischen Stress verknüpft, wodurch p53 einen zentralen Knotenpunkt in Tumorsuppressor-Netzwerken darstellt. In Mausmodellen wird Trp53 breit eingesetzt, um Mechanismen der Tumorinitiation, Signalwege der Therapieresistenz und die Aufrechterhaltung des Genoms in verschiedenen Geweben zu untersuchen.

p53 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Trp53-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

p53 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Trp53-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen p53-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Trp53-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.