Plasmide Double Nickase (m) p53: sc-423509-NIC

Le gène murin Trp53 code p53, un facteur de transcription spécifique de séquence qui intègre les signaux de dommages à l’ADN et de stress oncogénique afin de maintenir la stabilité du génome. p53 régule l’arrêt du cycle cellulaire, l’apoptose, la sénescence et les programmes de réparation de l’ADN via des voies incluant la signalisation ATM/ATR–CHK1/CHK2 et le contrôle transcriptionnel de cibles telles que Cdkn1a (p21), Bax et Mdm2. La perturbation de Trp53 dérègle le contrôle des points de contrôle et les réseaux transcriptionnels induits par le stress, ce qui en fait un élément central des études sur la biologie des suppresseurs de tumeur, la tolérance aux mutations et les réponses cellulaires au stress génotoxique. Dans les modèles murins, le statut de Trp53 influence fortement la transformation, la surveillance immunitaire et l’homéostasie tissulaire, soutenant des investigations mécanistiques portant sur le cancer et les processus liés au vieillissement.

p53 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Trp53 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Trp53. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Trp53. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Trp53.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.