Plasmide CRISPR/Cas9 KO p41-ARCb (m): sc-419207

Présentation

Arpc1b code pour p41-ARCb, une sous-unité régulatrice du complexe Arp2/3, qui initie des réseaux d’actine ramifiés nécessaires au remodelage dynamique du cytosquelette. Dans les cellules de souris, p41-ARCb soutient des processus tels que la formation de lamellipodes, la migration cellulaire, l’endocytose et les fonctions effectrices des cellules immunitaires, en coordonnant la polymérisation de l’actine en aval des GTPases de la famille Rho et des facteurs favorisant la nucléation. L’assemblage de l’actine dépendant d’Arp2/3 s’articule avec des voies de signalisation qui contrôlent l’adhésion, le trafic vésiculaire et l’organisation de la synapse immunologique. Une activité dérégulée d’ARPC1B/Arp2/3 est associée à des anomalies du comportement des cellules hématopoïétiques et immunitaires, et présente un intérêt pour l’étude, in vivo et in vitro, de phénotypes de type immunodéficience ainsi que des mécanismes inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO p41-ARCb (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Arpc1b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Arpc1b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Arpc1b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine p41-ARCb.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Arpc1b pour l'étude de la signalisation de p41-ARCb, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Arpc1b essentiels à la fonction de p41-ARCb
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Arpc1b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le p41-ARCb plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le p41-ARCb plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Arpc1b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le p41-ARCb plasmide HDR (m) et le p41-ARCb (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Arpc1b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Arpc1b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.