Plasmide CRISPR d'Activation (h) p41-ARCb: sc-405027-ACT

ARPC1B code p41-ARCb, une sous-unité régulatrice du complexe Arp2/3 qui favorise la polymérisation ramifiée de l’actine, nécessaire à la formation des lamellipodes, à l’endocytose et au remodelage dynamique du cytosquelette cortical. En couplant la nucléation de l’actine aux signaux de signalisation, ARPC1B soutient des processus tels que la migration cellulaire, l’organisation de la synapse immunologique et le trafic vésiculaire. Une altération de la fonction d’ARPC1B est associée à une dérégulation des réponses dépendantes de l’actine dans des contextes hématopoïétiques et immunitaires, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du contrôle du cytosquelette dans l’inflammation et la défense de l’hôte. ARPC1B est donc fréquemment étudié dans les voies qui régissent les changements de forme cellulaire, l’adhésion et la signalisation induite par les récepteurs, et qui dépendent de l’activité d’Arp2/3.

p41-ARCb Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ARPC1B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

p41-ARCb Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ARPC1B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ARPC1B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de p41-ARCb. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ARPC1B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de p41-ARCb au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie p41-ARCb dans les cellules tumorales présentant une expression de ARPC1B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.