Plasmide CRISPR d'Activation (h) p38 gamma MAPK12: sc-400427-ACT

MAPK12 code pour p38γ, une protéine kinase activée par le stress de la famille des MAP kinases (mitogen-activated protein kinases), qui intègre des signaux extracellulaires en programmes dépendants de la phosphorylation contrôlant la transcription, la dynamique du cytosquelette et l’adaptation métabolique. En tant que composant du réseau de signalisation des p38 MAPK, p38γ participe aux réponses aux cytokines inflammatoires et au stress environnemental, modulant en aval la régulation de l’expression génique et du renouvellement des protéines. L’activité de MAPK12 a été impliquée dans la différenciation cellulaire et la signalisation spécifique des tissus, avec des liens rapportés avec des contextes de signalisation oncogénique et des phénotypes inflammatoires où un remodelage des voies MAPK est fréquent. Ces caractéristiques font de p38γ (MAPK12) un nœud utile pour disséquer les interactions (crosstalk) entre la signalisation de stress et les programmes associés à MAPK/ERK, à NF-κB, ainsi qu’à d’autres circuits régulateurs pilotés par des kinases.

p38 gamma MAPK12 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAPK12 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

p38 gamma MAPK12 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAPK12 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAPK12, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de p38 gamma MAPK12. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAPK12 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de p38 gamma MAPK12 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie p38 gamma MAPK12 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAPK12 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.