Plasmide Double Nickase (h) p35: sc-400431-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) p35 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide p35 Double Nickase (h) et le plasmide p35 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CDK5R1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: p35 Antibody (B-1): sc-518009
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) p35 | sc-400431-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) p35 | sc-400431-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDK5R1 code pour p35, une sous-unité régulatrice enrichie dans les neurones qui se lie à la kinase dépendante des cyclines 5 (CDK5) et l’active, orientant l’activité de la kinase vers des substrats qui contrôlent le remodelage du cytosquelette, la croissance des neurites, le transport des vésicules synaptiques et la migration neuronale. Via la signalisation CDK5/p35, CDK5R1 influence des réseaux de phosphorylation qui interfèrent avec la signalisation MAPK, le guidage axonal et des programmes du neurodéveloppement. Une dérégulation du clivage de p35 et une activité CDK5 altérée ont été associées à des réponses neuronales au stress et à des événements de phosphorylation aberrants impliqués dans des mécanismes de maladies neurodégénératives et neurodéveloppementales. En conséquence, CDK5R1 est largement étudié pour son rôle dans le maintien de la structure et de la fonction neuronales en conditions physiologiques et pathologiques.
p35 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDK5R1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDK5R1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDK5R1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDK5R1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.