Plasmide CRISPR/Cas9 KO p35 (h): sc-400431

Présentation

CDK5R1 code pour p35, une sous-unité régulatrice enrichie dans les neurones qui se lie à la kinase dépendante des cyclines 5 (CDK5) et l’active, afin de contrôler l’activité de la kinase dans l’espace et dans le temps au niveau des membranes et à l’intérieur des neurites. Le complexe CDK5–p35 coordonne la migration neuronale, le guidage axonal, la synaptogenèse et la plasticité synaptique dépendante de l’activité par phosphorylation de protéines du cytosquelette et de signalisation, le reliant ainsi à des voies qui gouvernent la dynamique des microtubules et de l’actine. Une dérégulation du renouvellement de p35 et sa conversion en p25 peut prolonger l’activité de CDK5 et perturber la protéostasie, contribuant à des mécanismes étudiés dans la neurodégénérescence et le stress excitotoxique. Des modifications de l’expression de CDK5R1 ou de la signalisation CDK5–p35 ont également été examinées dans des contextes tels que l’épilepsie, des phénotypes du neurodéveloppement et les réponses neuronales aux lésions.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO p35 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CDK5R1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CDK5R1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CDK5R1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine p35.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CDK5R1 pour l'étude de la signalisation de p35, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CDK5R1 essentiels à la fonction de p35
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CDK5R1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le p35 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le p35 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CDK5R1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le p35 plasmide HDR (h) et le p35 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CDK5R1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CDK5R1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.