Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
p35 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400431
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- p35 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico p35, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: p35 Antibody (B-1): sc-518009
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
p35 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400431 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CDK5R1 codifica p35, una subunità regolatoria arricchita nei neuroni che si lega e attiva la chinasi ciclina‑dipendente 5 (CDK5) per controllarne l’attività spaziotemporale a livello delle membrane e all’interno dei neuriti. Il complesso CDK5–p35 coordina la migrazione neuronale, la guida assonale, la sinaptogenesi e la plasticità sinaptica dipendente dall’attività attraverso la fosforilazione di proteine del citoscheletro e di segnalazione, collegandosi così a vie che regolano la dinamica di microtubuli e actina. Una deregolazione del turnover di p35 e la sua conversione in p25 possono prolungare l’attività di CDK5 e perturbare la proteostasi, contribuendo a meccanismi studiati nella neurodegenerazione e nello stress eccitotossico. Alterazioni dell’espressione di CDK5R1 o della segnalazione CDK5–p35 sono state inoltre esaminate in contesti quali l’epilessia, fenotipi del neurosviluppo e le risposte neuronali al danno.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO p35 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDK5R1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDK5R1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDK5R1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina p35.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDK5R1 per lo studio della segnalazione di p35, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CDK5R1 critici per la funzione di p35
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDK5R1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal p35 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal p35 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDK5R1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal p35 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR p35 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDK5R1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDK5R1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.