Plasmide CRISPR d'Activation (h) p300: sc-400055-ACT

Le gène humain **EP300** code **p300**, une acétyltransférase des lysines et coactivateur transcriptionnel qui intègre des signaux provenant de multiples facteurs de transcription afin de réguler l’accessibilité de la chromatine et l’expression génique. p300 acétyle les histones ainsi que des protéines non histones, modulant l’activité des enhancers et contrôlant des programmes impliqués dans la progression du cycle cellulaire, la différenciation, les réponses aux dommages de l’ADN et la signalisation du stress. EP300 participe à des voies liées à **MAPK/ERK**, **TGF-β/SMAD**, l’hypoxie (**HIF**) et la régulation transcriptionnelle médiée par **p53**, via de vastes réseaux d’interactions protéine–protéine. La dérégulation de l’acétylation et du contrôle transcriptionnel dépendants d’EP300/p300 est associée à des altérations de la spécification des lignages et à des états transcriptionnels aberrants observés dans divers modèles de maladies.

p300 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EP300 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

p300 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EP300 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EP300, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de p300. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EP300 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de p300 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie p300 dans les cellules tumorales présentant une expression de EP300 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.