Plasmide Double Nickase (m) P2Y9: sc-429620-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) P2Y9 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide P2Y9 Double Nickase (m) et le plasmide P2Y9 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Lpar4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) P2Y9 | sc-429620-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Lpar4* code le récepteur de l’acide lysophosphatidique P2Y9, un RCPG qui couple les signaux extracellulaires de LPA aux protéines G hétérotrimériques afin de réguler des cascades de seconds messagers telles que l’activation de la phospholipase C, la mobilisation du calcium intracellulaire et la signalisation MAPK/ERK. Par ces voies, P2Y9 influence la migration cellulaire, le remodelage du cytosquelette, ainsi que des programmes de prolifération et de survie qui façonnent le développement tissulaire et les réponses inflammatoires. La signalisation LPA–LPAR4 interagit également avec l’activité des GTPases de la famille Rho et peut moduler l’AMPc selon le contexte cellulaire, reliant l’activation du récepteur à des modifications transcriptionnelles et métaboliques plus larges. La dérégulation de la signalisation des récepteurs du LPA a été associée à la fibrose, à des dysfonctionnements immunitaires et à des phénotypes liés aux tumeurs, ce qui fait de *Lpar4* une cible pertinente pour des études mécanistiques de la signalisation induite par le microenvironnement.
P2Y9 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Lpar4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Lpar4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Lpar4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Lpar4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.