Plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y5 (h): sc-405189

Présentation

LPAR6 (également connu sous le nom de P2Y5) code un récepteur couplé aux protéines G qui répond à l’acide lysophosphatidique et régule la signalisation intracellulaire via des protéines G hétérotrimériques. L’activité de P2Y5 influence des voies liées à Rho/ROCK et aux MAPK, en coordonnant, selon le contexte, le remodelage du cytosquelette, l’adhérence cellule–cellule et la motilité. Ce récepteur est fortement impliqué dans la biologie de la peau et du follicule pileux, où des altérations de la signalisation LPAR6 sont associées à des troubles congénitaux de la croissance des cheveux ainsi qu’à des phénotypes plus larges touchant l’homéostasie épithéliale. De plus, la signalisation lipidique médiée par LPAR6 recoupe des processus inflammatoires et liés à la fonction barrière, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques dans les kératinocytes et d’autres modèles épithéliaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LPAR6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LPAR6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LPAR6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine P2Y5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LPAR6 pour l'étude de la signalisation de P2Y5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LPAR6 essentiels à la fonction de P2Y5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LPAR6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le P2Y5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le P2Y5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LPAR6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le P2Y5 plasmide HDR (h) et le P2Y5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LPAR6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LPAR6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.