Plasmide Double Nickase (m) P2Y2: sc-422096-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) P2Y2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide P2Y2 Double Nickase (m) et le plasmide P2Y2 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant P2ry2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: P2Y2 Antibody (H-5): sc-518121
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) P2Y2 | sc-422096-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) P2Y2 | sc-422096-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **P2ry2** code le récepteur **P2Y2**, un récepteur purinergique couplé aux protéines G, activé par l’ATP et l’UTP extracellulaires, qui se couple principalement à **Gq/11** pour stimuler la **phospholipase C**, la mobilisation du calcium dépendante de l’**IP3**, ainsi que les voies de signalisation **PKC/MAPK**. P2Y2 régule le transport épithélial des ions et des fluides, la clairance mucociliaire et la mécanotransduction, et il module le remodelage du cytosquelette, la migration cellulaire et la production de cytokines dans de nombreux tissus. Par ces mécanismes, P2Y2 contribue à la signalisation de l’immunité innée et aux réponses inflammatoires, avec un intérêt de recherche pour la biologie des voies aériennes, le remodelage vasculaire et les modèles de lésions tissulaires et de réparation. Une dérégulation de la signalisation purinergique impliquant P2Y2 a été étudiée dans des contextes d’inflammation chronique et de fibrose, ainsi que dans le microenvironnement tumoral et les processus métastatiques dans des systèmes expérimentaux.
P2Y2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus P2ry2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de P2ry2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de P2ry2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de P2ry2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.