Plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y1 (h): sc-401759

Présentation

P2RY1 code le récepteur humain P2Y1, un récepteur purinergique couplé aux protéines G, activé principalement par l’ADP extracellulaire pour initier la signalisation Gq/PLCβ, la mobilisation du Ca2+ médiée par l’IP3 et les réponses en aval des voies PKC/MAPK. P2Y1 contribue à la régulation de l’activation et de l’agrégation plaquettaires, du tonus vasculaire et de la communication intercellulaire dans des contextes endothéliaux et liés au système immunitaire via la détection des nucléotides. Dans le système nerveux, la signalisation P2Y1 peut moduler l’activité gliale et la dynamique des réseaux synaptiques, reliant les signaux purinergiques aux processus inflammatoires et neuromodulateurs. Une activité dérégulée de P2RY1 a été associée à des phénotypes thrombotiques et cardiovasculaires, et elle est étudiée plus largement dans le contexte de la neuroinflammation et de la signalisation du microenvironnement tumoral, où les nucléotides extracellulaires façonnent le comportement cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène P2RY1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du P2RY1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert P2RY1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine P2Y1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en P2RY1 pour l'étude de la signalisation de P2Y1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de P2RY1 essentiels à la fonction de P2Y1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de P2RY1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le P2Y1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le P2Y1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus P2RY1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le P2Y1 plasmide HDR (h) et le P2Y1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie P2RY1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles P2RY1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.