Plásmido CRISPR de Activación (m) P2X7: sc-422093-ACT

El gen P2rx7 del ratón codifica el receptor P2X7, un canal catiónico activado por ATP altamente expresado en células inmunitarias y gliales, que vincula señales extracelulares de peligro con la entrada de Ca²⁺/Na⁺, la salida de K⁺ y la formación de poros en la membrana bajo estimulación sostenida. P2X7 es un regulador clave aguas arriba de la señalización del inflamasoma, promoviendo la activación de NLRP3 y la maduración de IL‑1β/IL‑18, y también influye en la actividad de fosfolipasas, las vías MAPK/NF‑κB y los programas de muerte celular. A través de estos mecanismos, P2rx7 contribuye a la regulación de la liberación de citocinas, las respuestas antimicrobianas de los fagocitos y la comunicación neuroinmune. La señalización alterada de P2X7 se ha asociado con fenotipos inflamatorios y neuroinflamatorios, hipersensibilidad al dolor y la inmunorregulación del microambiente tumoral en modelos preclínicos, lo que respalda su valor para estudios centrados en vías.

P2X7 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de P2rx7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

P2X7 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus P2rx7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional P2rx7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de P2X7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo P2rx7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de P2X7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía P2X7 en células tumorales con expresión de P2rx7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.