Plasmide CRISPR d'Activation (h) P2X1: sc-404030-ACT

Le gène humain **P2RX1** code le canal cationique **P2X1** activé par l’ATP, un récepteur purinergique trimérique qui s’ouvre rapidement en réponse à l’ATP extracellulaire afin de permettre l’entrée de **Na+** et de **Ca2+** et la dépolarisation de la membrane. La signalisation via P2X1 contribue à la neurotransmission purinergique, à l’activation plaquettaire, à la chimiotaxie des leucocytes et à la contraction du muscle lisse, reliant la libération de nucléotides extracellulaires à des voies intracellulaires dépendantes du calcium. En régulant la dynamique calcique et l’excitabilité, P2X1 influence le tonus vasculaire, les réponses thrombo-inflammatoires et les programmes d’activation des cellules immunitaires. Des altérations de l’activité P2RX1/P2X1 ont été étudiées dans des contextes tels que la fonction plaquettaire et la biologie de la thrombose, la signalisation inflammatoire et la physiologie de l’appareil reproducteur, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques des voies purinergiques.

P2X1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de P2RX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

P2X1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus P2RX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription P2RX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de P2X1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus P2RX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de P2X1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie P2X1 dans les cellules tumorales présentant une expression de P2RX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.